动物抗体检测的**主要方法是固相水平-酶联免疫吸附试验(ELISA),胶体金检测法,酶联免疫吸附试验法具有操作简单、灵敏度高和特异性强的特点,目前在临床实验室已被广泛应用。近年来,大部分养殖场都开始用动物抗体检测卡进行动物免疫抗体监测,酶联免疫抗体检测试剂盒,提高了检测结果的重复性和准确性,同时减轻了工作人员的劳动强度。目前,常见的抗体检测方法有:间接血凝试验(IHA)、荧光抗体标记技术、酶标记技术、同位素抗体标记技术、免疫胶体金技术等。同位素抗体标记技术是**早建立的标记免疫测定方法,其基本原理是利用标记抗原和非标记抗原对特异性抗体的竞争结合术。然而目前使用**普遍的抗体检测方法还是ELISA检测技术和胶体金检测技术。
1)血清的采集。采集过程中防止溶血,溶血会导致吸光度升高,影响检测结果。血液应在室温中凝固20~30min,然后2,000~3,000r/min离心,取上清部分,血清量应足够检测所需。2)移液器。使用的移液器要定期校准,确保试剂用量精细,检测数据的精细。3)吸头:配合移液器量程使用。每个标准品与待测样品不能重复使用同一个吸头加样。加入不同样品和不同试剂成分时,应该更换移液器吸头,以避免出现交叉污染。4)洗涤液、稀释液配置以及盛放洗涤液的容器应保持清洁,以防止微生物污染导致非特异性反应。按照说明书,如20倍稀释,即1mL浓缩洗涤液加入19mL蒸馏水。稀释后的洗液可在室温下保存24h。如果出现结晶物,可放置于37℃恒温箱内5~10min。浓缩洗涤液出现浑浊或絮状物请勿使用。
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